Рекомбинантный аллерген

Рекомбинантный аллерген – АнтиАлергик

Рекомбинантный аллерген

Ресурсы сайта (1449 работ)

ФС.3.3.1.0001.15 Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Аллерген туберкулезный                               ФС.3.3.1.0001.15

рекомбинантный в                                                Взамен ГФ Х, ст. 706,

стандартном разведении                                ФС 42-19ВС-86

Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген туберкулезный рекомбинантный, который представляет собой гибридный белок с молекулярной массой около 27 кДа, состоящий из 2 антигенов CFP10-ESAT6, продуцируемый генетически модифицированной культурой Еscherichia соli BL21(DE3)/pCFP-ESAT.

Аллерген туберкулезный рекомбинантный предназначен для диагностики туберкулеза.

ПРОИЗВОДСТВО

Производство препарата аллергена туберкулезного рекомбинантного должно осуществляться с соблюдением установленных правил организации производства и контроля качества генно-инженерных иммунобиологических лекарственных средств, гарантирующих качество и безопасность для человека.

Выращенную культуру клеток бактерий-продуцентов отделяют от среды и лизируют для высвобождения белка. Лизат клеток-продуцентов проходит стадии хроматографического выделения и очистки целевого белка-концентрата.

Очищенный концентрат – полуфабрикат (субстанция) аллергена туберкулезного подлежит проверке на стерильность, отсутствие сенсибилизирующих свойств, содержание белка, специфичность, специфическую активность, аномальную токсичность.

Стандартное разведение аллергена получают путем разведения концентрата изотоническим фосфатным буферным раствором до содержания 0,2 мкг гибридного белка в 0,1 мл.

Описание

Бесцветная прозрачная жидкость без посторонних примесей.

Подлинность

Препарат при внутрикожном введении морским свинкам, зараженным тест-штаммом Mycobacteriumtuberculosis, должен вызывать положительные кожные реакции, а у животных, иммунизированных вакциной БЦЖ, реакции должны отсутствовать (разделы «Специфическая активность», «Специфичность»).

Прозрачность

Должен быть прозрачным. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность

Должен быть бесцветным. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

Извлекаемый объем

Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

рН

От 7,35 до 7,55. Определяют потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия»» href=»http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-1-0004-15-ionometriya/»>ОФС «Ионометрия».

Аномальная токсичность

Должен быть нетоксичным. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность»» href=»http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0004-15-anomalnaya-toksichnost/»>ОФС «Аномальная токсичность» на 5 мышах, тест-доза 0,5 мл.

Бактериальные эндотоксины

Не более 5 ЕЭ/мл. Определение проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Стерильность

Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность»» href=»http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0003-15-sterilnost/»>ОФС «Стерильность» методом прямого посева или мембранной фильтрации.

Специфическая активность

В 0,1 мл препарата должно содержаться 0,2 мкг аллергена туберкулезного рекомбинантного. Индекс специфической активности должен быть равен (1,00 ± 0,05). Испытание проводят на морских свинках, зараженных живой культурой Mycobacterium tuberculosis.

Морских свинок (альбиносов или белокожих Hartley) массой (350±50) г содержат на постоянном пищевом рационе и в одинаковых условиях окружающей среды. Сенсибилизацию проводят путем заражения животных подкожно или аэрогенно вирулентным штаммом M.tuberculosis.

Используют третью генерацию тест-штамма с плотной среды для выращивания микобактерий. Морских свинок используют для постановки проб не более 2 раз в период от 30 до 120 сут после инфицирования с интервалом между постановками проб не менее 30 сут.

При повторном использовании животных пробы ставят на участках кожи, ранее не подвергавшихся воздействию препаратов.

За 24 ч до постановки туберкулиновых проб шерсть на спине или боках морских свинок удаляют сплошной полосой шириной 3-4 см.

Испытание препарата проводят на 6 зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках. Заполняют 4 шприца испытуемым образцом и 4 шприца разведенным (0,2 мкг/0,1 мл) стандартным образцом (СО) аллергена туберкулезного рекомбинантного.

Каждой морской свинке по методу случайных чисел вводят по 0,1 мл внутрикожно 4 пробы испытуемого образца и 4 пробы СО. Реакцию учитывают через 24 ч, измеряя 2 взаимно перпендикулярных диаметра эритемы в мм. Подсчитывают суммы реакций на испытуемый препарат и на СО.

Специфическую активность оценивают по индексу специфической активности (I) – отношению суммы реакций на испытуемый препарат к сумме реакций на разведенный СО при отсутствии достоверных различий между средними реакциями на испытуемый препарат и СО.

Если полученные результаты выходят за указанные пределы, испытание повторяют. Результаты 2 испытаний усредняют.

Специфичность

Морские свинки, иммунизированные вакциной БЦЖ, не должны реагировать на внутрикожное введение 0,2 мкг в 0,1 мл испытуемого аллергена туберкулезного рекомбинантного и давать положительные реакции – папулы диаметром не менее 5 мм на 2 ТЕ в 0,1 мл СО очищенного туберкулина. Испытание проводят на 3 морских свинках не ранее чем через 30 дней после введения им по 0,5 мг вакцины БЦЖ.

Фенол

От 0,20 до 0,30 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Количественное определение фенола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах».

Производственные штаммы

Рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT — прототрофный штамм E.

coli В (депонирован в ИБХ РАН), который обладает рядом характеристик, отличающих его от штамма предшественника: быстрый рост на минимальной среде, способность к синхронизации, устойчивый рост культуры в условиях биосинтеза белка и недостатка питательных веществ, дефектность системы рестрикции ДНК В-типа.

Штамм несет оригинальную плазмиду pCFP10-ESAT6, содержащую генетическую конструкцию из 2 генов M.tuberculosis –cfp10 и esat 6и ген устойчивости к ампициллину (bla). Штамм устойчив к ампициллину (100 – 150 мкг/мл) и чувствителен к остальным антибиотикам.

Для контроля качества препарата используют тест-штаммы M.tuberculosis (вирулентный) и M. bovis BCG — 1 из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов.

Упаковка и маркировка

В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 оС в условиях, исключающих замораживание. Допускается транспортирование при температуре не выше 18 °С в течение 15 дней.

Хранение

При температуре от 2 до 8 °С. Не замораживать!

Источник:

Новые возможности с рекомбинантными аллергенами › Клиника – Форпост

В составе специфических аллергенов, сейчас возможно также выделить наиболее активные белковые компоненты, которые вызывают выработку IgE антител и аллергические симптомы.

Например, проводя обычный тест на аллергию, выявлена сенсибилизация к аллергену пыльцы березы. Но этот аллерген включает несколько аллергенных компонентов. Это и есть рекомбинантные аллергены.

Рекомбинантные аллергены – это аллергенные молекулы, полученные методом генной инженерии, первоначально выделенные из аллергенного экстракта.

Большинство существующих рекомбинантных аллергенов экспрессированы в клетке Esherichia coli, и по своим структурным и иммунологическим свойствам полностью соответствуют натуральным протеинам. Другие высокотехнологические системы основаны на воспроизведении

рекомбинантных аллергенов в дрожжевой, бактериальной или инсектной клетке.

Рекомбинантные аллергены обладают тем же специфичным свойством к индукции IgE-антител, что и компоненты натуральных экстрактов и обычно демонстрируют высокую чувствительность и специфичность в тестах in vitro и in vivo.

Сегодня множество аллергенных молекул из различных натуральных источников аллергенов могут быть клонированы, секвинированы и экспрессированы как рекомбинантные аллергены.

Использование рекомбинантных аллергенов позволяет выявить сенсибилизацию к компонентам ( специфичным белкам).

Таким образом, использование рекомбинантных аллергенов – это важная информация о триггерных стимулах на молекулярном уровне. Исследование реактивности к рекомбинантным аллергенам дает возможность изучать более сложные популяционные явления, такие как географические различия в IgE-опосредованной чувствительности и перекрестные реакции между различными аллергенами.

• В случае, когда в натуральном экстракте содержание аллергенных компонентов низкое, дополнение основного рекомбинантного белка к экстракту улучшает клиническую чувствительность и количественную постановку теста.

• Рекомбинантные аллергены могут быть объединены для формирования композиции, содержащей оптимальное соотношение основных аллергенных компонентов из натурального экстракта, и исключающих компоненты, имеющие малое диагностическое значение. Это открывает интересные возможности для улучшения качества тестов в будущем.

• Использование тестов на отдельные аллергенные компоненты дополняют традиционные тесты на IgE антитела с целью получения более детальной информации. Возможность исследовать чувствительность к отдельным компонентам аллергена может пролить свет на необъяснимые явления.

• Тестирование с отдельными компонентами используется для более подробного исследования и объяснения аллергической реактивности, а также для определения перекрестной реактивности к различным аллергенам.

Что такое перекрестная аллергия и для чего это нужно

Для пациентов, у которых появляются симптомы после употребления в пищу яблока или других фруктов, обычный тест, основанный на применении экстракта, будет выявлять причиннозначимый аллерген, такой как яблоко, персик, груша. Однако истинной причиной может быть сенсибилизация к пыльце деревьев или трав, перекрестная реакция между компонентами аллергенов, имеющими одинаковую структуру и представленными в пыльце растений и пищевых белках.

Тесты на отдельные аллергеные компоненты могут быть использованы для получения большей информации о причине сенсибилизации на молекулярном уровне, например, к молекулам пыльцы, LTPs или профилинам, и делает возможным сделать выводы врачам о клинических проявлениях.

Так как у пациентов, реагирующих на пыльцу, симптомы проявляются только в определенный сезон, то симптоматическое лечение в период цветения может быть эффективно, а для пациентов чувствительных к LTP еще обязательно необходима элиминационная диета.

К тому же у этих пациентов, вероятно, разовьются более тяжелые симптомы.

Вот объяснение почему ребенок у которого была аллергия к латексной соске со временем дал реакцию на банан или авокадо – наличие рекомбинатных аллергенов ( перекрестная чувствительность, один и тот же по структуре белок аллерген)

Более точный ответ нужна ли СИТ

Рекомбинантные аллергены дают возможность высокоспецифической диагностики, с помощью которой возможно определить объективные критерии для назначения специфической иммунотерапии (СИТ).

Тесты с рекомбинантными аллергенами открывают новые возможности прогнозирования, будет ли назначение СИТ эффективным или нет, и назначения адекватной терапии.

Если аллергические реакции у пациента обусловлены сенсибилизацией к основному компоненту аллергена.

С высокой степенью вероятности можно прогнозировать высокий терапевтический эффект от СИТ с экстрактом пыльцы березы, который будет содержать высокую концентрацию этого компонента.

Источник: https://continentnn.ru/lechenie/rekombinantnyj-allergen.html

Пыльца веером: создан революционный препарат от аллергии на березу

Рекомбинантный аллерген

Российские и австрийские ученые совместно разрабатывают первую в мире вакцину от аллергии на березу. Она предназначена как для профилактики, так и для терапии.

Исследователи полагают, что препарат позволит полностью избавиться от мучительной болезни, широко распространенной среди россиян.

Сейчас страдающим от аллергии людям приходится пожизненно пить лекарства или вовсе переезжать в другие регионы, а то и страны. Вакцина находится на стадии доклинических испытаний.

Белоствольный аллерген

По данным Института иммунологии ФМБА России — головного учреждения, занимающегося вопросами аллергологии в стране, пыльца березы вызывает порядка 30% всех респираторных аллергий.

Распространенность этих деревьев у нас очень велика — березовые рощи в России по площади занимают третье место после хвойных и смешанных лесов (в которых, кстати, также может расти береза). Пыльца деревьев легко разносится на большие расстояния, имеет очень мелкий размер (20 микрон) и глубоко проникает в дыхательные пути и легкие.

Это очень опасно, потому что у людей, склонных к аллергии, может развиться бронхиальная астма и даже отек легких, в некоторых случаях есть риск летального исхода.

Группа специалистов из Института иммунологии ФМБА России и Венского медицинского университета сейчас работает над созданием первой в мире вакцины от аллергии на пыльцу березы. Как пояснил «Известиям» директор Института иммунологии Муса Хаитов, Россия занимает безусловное первое место по заболеваемости этим недугом, однако страдают от него и в других странах.

— Пыльца березы — один из наиболее важных аллергенных источников в странах Северного полушария, в частности Центральной и Северной Европы.

Она вызывает развитие тяжелых симптомов поражения респираторного тракта, а также проявлений пищевой и кожной аллергии, — отметил эксперт.

— Иногда единственным решением для таких больных может стать переезд в тот регион, где нет берез, поэтому мы задумались о создании такой вакцины.

Отменить эмиграцию

Как пояснил специалист, с попаданием аллергена, в данном случае пыльцы березы, в дыхательные пути, в организме происходит образование аллерген-специфических IgE-антител. Они вызывают мгновенный выброс противовоспалительных медиаторов — цитокинов и протеаз, которые провоцируют развитие большинства клинических симптомов.

По словам Мусы Хаитова, на сегодняшний день пациенты, страдающие аллергией, получают терапию противоаллергическими препаратами, которые лишь уменьшают симптомы, но не влияют на причину или течение болезни.

— Единственным эффективным методом лечения считается аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ).

Она заключается в использовании лечебных аллергенов в возрастающих дозах, что приводит к изменению характера иммунного ответа, — продолжает эксперт.

— АСИТ влияет на причину болезни и может предотвратить развитие тяжелых форм заболевания. Но у такой терапии есть серьезные побочные эффекты в связи с использованием природных экстрактов аллергенов.

В большинстве случаев лекарства на основе природных аллергенов вызывают местные аллергические реакции — сыпь, зуд и раздражение, но в некоторых случаях у пациентов могут возникнуть более серьезные симптомы вплоть до приступов удушья. Эта терапия не используется для профилактики аллергии, так как может спровоцировать ее возникновение.

Поэтому ученые создали рекомбинантный (искусственный) аналог основного аллергена березы — белка Betv 1. Проведенные исследования показали, что препарат на его основе способен вызывать образование защитных антител и эффективно блокировать развитие аллергической реакции.

И лечение, и профилактика

Первые испытания рекомбинантных вакцин были проведены профессором Рудольфом Валентой из Венского медицинского университета в Австрии.

Сейчас научная группа под его руководством ведет работу над совершенствованием препарата в России. Проект получил поддержку от российского правительства и выполняется в рамках мегагранта.

Первые результаты, полученные совместно с Институтом иммунологии, говорят о высокой эффективности и безопасности препарата.

— Созданные нами вакцины способны полностью блокировать IgE-опосредованное аллергическое воспаление, — отметил профессор Валента в разговоре с «Известиями».

Проведенные исследования показали, что рекомбинантная вакцина эффективна как для профилактики возникновения аллергии на березу, так и для лечения ее хронической формы.

Так как береза в России — один из основных аллергенов, ученые полагают, что в дальнейшем вакцину можно будет вводить детям и беременным женщинам.

Это позволит практически полностью исключить заболеваемость населения этим видом аллергии.

Метод иммунотерапии, который предлагают использовать аллергологи ФМБА, дает хорошие результаты, считает сотрудник кафедры экологии и генетики ТюмГУ (вуза — участника проекта «5-100») Сергей Артеменко.

— Предлагаемый метод, безусловно, будет эффективен, поскольку такой принцип лечения давно известен. Ослабленный агент-аллерген обычно является основой прививок, которые сейчас используются повсеместно, — считает эксперт.

Разработки такой вакцины ведутся в Институте иммунологии уже десятки лет, но именно проект с австрийцами ученые считают наиболее успешным.

В частности, как ранее писали «Известия», в ФМБА завершили разработку вакцин (исследования продолжались более 20 лет) для специфического лечения аллергий — аллерготропинов. Они в несколько раз эффективнее существующих аналогов.

Главное отличие от рекомбинантной вакцины, которую ученые разрабатывают сейчас, в том, что аллерготропины создаются из модифицированных натуральных аллергенов с добавлением иммуномодулятора полиоксидония.

Препараты «Берпол» (от аллергии на пыльцу березы), «Полпол» (от пыльцы полыни) и «Тимпол» (от тимофеевки) успешно прошли доклиническую стадию. Два из них ждут решения Минздрава о начале клинических испытаний. На рынок ни одна из вакцин пока не вышла.

По официальным данным Минздрава, распространенность аллергических заболеваний среди жителей России составляет от 5 до 20,5%. А по результатам эпидемиологических исследований, проведенных в Институте иммунологии ФМБА, колебания составляют от 17,5 до 30%.

Структура аллергических заболеваний напрямую зависит от климато-географических и экологических условий. Чаще всего встречается повышенная чувствительность к бытовым аллергенам — 56%, эпидермальным — 55,1% пыльцевым — 43,3%.

К инфекционным аллергенам чувствительность выявлена у 35% обследованных пациентов.

Сезон аллергии на березу в России начинается в середине апреля, пик приходится на конец мая – июнь, а завершается он только ближе к осени.

Источник: https://iz.ru/857993/mariia-nediuk/pyltca-veerom-sozdan-revoliutcionnyi-preparat-ot-allergii-na-berezu

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.