Методы определения антибиотикочувствительности

Содержание

Анализ на чувствительность к антибиотикам: что это значит и как сдавать?

Методы определения антибиотикочувствительности

Современная клиническая практика использует два основных принципа, на основании которых производится назначение антибактериальных средств – эмпирический и этиотропный.

  1. Эмпирический (данные получены путем наблюдения или опыта) принцип основывается на накопленных знаниях о сущности и чувствительности бактерий, закономерности их роста, а также резистентности (сопротивляемости, выживаемости) микроорганизмов.
  2. Этиотропный. При этиотропном принципе первоначально предполагается выявить флору, которая является возбудителем инфекции, а затем определить чувствительность бактерии к определенным антибиотикам.

Определение чувствительности флоры

Бактерии, которые выделяются у больных, подлежат проверке на чувствительность к антибактериальным препаратам.

При этом появляется возможность более рационального проведения терапии антибиотиками. Существуют две основные группы, на которые делятся методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам:

  • Диффузионные методы;
  • Методы разведения.

Также существуют ускоренные методы, позволяющие сократить время на определение чувствительности.

к оглавлению ↑

Диско-диффузионный метод

Диффузионный метод дисков, которые насыщаются антибиотиками, получил широкое распространение из-за простоты. При этом способе определение чувствительности осуществляется следующим образом:

  1. Чашка Петри (лабораторный сосуд, имеющий форму плоского цилиндра) частично заполняется питательным веществом – мясопептонным агаром.

    Поверх него наносится (засевается) суспензия бактерий, имеющая определенную плотность.

  2. Затем в чашку помещаются картонные диски, пропитанные некоторым количеством антибиотика, которое указывается на этикетке. Антибиотик, проникая в агар, формирует зону вокруг дисков, где рост микроорганизмов подавляется.
  3. Чашка Петри помещается в термостат, в котором поддерживается температура 37 °C. Флору инкубируют 18 часов.

    Результат определяется измерением в миллиметрах диаметра той зоны, которая возникла вокруг диска.

При выполнении анализа на чувствительность к антибиотикам немаловажную помощь оказывает Е-тест.

Это исследование выполняется так же, как и диско-диффузионный способ тестирования. При этом вместо диска используется тест в виде полоски, на которую антибиотик наносится с увеличением концентрации в соответствии с градуировкой от минимума к максимуму.

Зона, в которой рост бактерий подавляется, имеет эллипсовидную форму. Место, где происходит соприкосновение этой зоны и полоски, определяется как МПК. Расшифровка аббревиатуры – минимальная подавляющая концентрации, которая считывается количественно согласно цифрам градуировки.

Диффузионные методы просты и доступны для выполнения практически в любой лаборатории. В связи с тем, что тест по цене довольно дорог, на практике большее распространение получил метод дисков.

к оглавлению ↑

Метод разведения

В основе методов разведения лежит алгоритм двойных последовательных разведений. В этом способе каждая последующая концентрация антибиотика в два раза ниже предыдущей. Данные разведения вносятся в бульон или агар, являющиеся питательной средой. Поверх засевают флору.

После выдерживания в термостате и окончания инкубационного периода (18-20 часов) производится определение полученных результатов, выраженных в единицах измерения мкг/мл, в которых измеряется МПК.

Заметный рост микроорганизмов проявляется в виде помутнения питательной среды. Это свидетельствует о недостаточности концентрации антибиотика. МПК – это наименьшее содержание антибиотика в сосуде, при котором зримо не определяется помутнение, свидетельствующее о жизнедеятельности бактерий.

к оглавлению ↑

Ускоренные методы

Наименьший промежуток времени, через который может быть получен результат исследования на чувствительность бактерий по вышеописанным методам – около 18 часов. Однако при тяжелом протекании инфекционного заболевания – это длительный период.

В экстренных случаях лечение начинается еще до получения лабораторных результатов. В связи с этим ускоренные методы имеют явно выраженный практический интерес.

В их основе лежат следующие принципы исследования:

  1. Подавление антибиотиком ферментативной (регулируемой как ускорителями, так и замедлителями) активности микробов. При этом тесте индикатор изменяет свой окрас в зависимости от того, в какой степени чувствительна флора, культивированная на глюкозе. При добавлении дрожжевого экстракта к среде время получения результата – около 2,5 часов.
  2. Изменение в количественном выражении окислительно-восстановительного потенциала (Eh) при культивировании микроорганизмов в питательной для них среде. При этом тесте добавляемые в среду специальные индикаторы изменяют свой цвет. Метод прост в техническом исполнении. Результаты исследования могут быть получены уже через два часа.
  3. Обнаружение методом фазово-контрастной микроскопии образовавшихся инволюционных (находящихся в обратном развитии) форм микроорганизмов. При этом фиксируется концентрация антибиотика, вызвавшая такое изменение.

к оглавлению ↑

Необходимость назначения теста

Воздействие антибактериальных препаратов вызывает приостановку развития микроорганизмов или может привести к их гибели.

Отдельный вид микробов может оказаться чувствителен только к определенным препаратам, которые имеют свой спектр действия. Для их выявления возникает необходимость в назначении теста.

Однако в связи с существенным изменением экологии и производством целого ряда новых антибактериальных препаратов, происходит процесс мутации (преобразования генотипа) бактерий.

Например, синегнойная палочка размножается даже в таком антисептике, как раствор фурацилина. Она является распространенным возбудителем внутрибольничных (нозокомиальных) инфекций и обнаруживается при гнойных ранах, абсцессах, инфекциях мочеполовой системы.

Синегнойная палочка – причина четверти случаев выявления первичных бактериемий (наличие в крови бактерий).

При этом данный организм может формировать чувство кворума благодаря имеющимся сигнальным молекулам, что дает возможность образовать защитную биопленку от вредных для нее веществ.

Синегнойная палочка размножается при повышенной влажности и наличии кислорода.

Является условно-патогенным видом бактерий. Это означает, что данная бактерия постоянно присутствует в организме человека. Ее патологическое размножение происходит при появлении определенных условий. Синегнойная инфекция является опасным заболеванием, которое носит остро выраженную форму. Одну треть инфекций, выявляемых при исследовании анализа мочи вызывает данная палочка.

Еще одним представителем специфических микроорганизмов является уреаплазма, которая становится причиной уреаплазмоза. Эти бактерии обитают в мочевых путях людей и относятся к условно-патогенным. Могут вызывать некоторый ряд заболеваний, однако обнаруживаются и у здорового человека.

Уреаплазма передается путем половых контактов или от матери к ребенку при родах. Заражение в быту имеет малую вероятность. Лечение уреаплазмоза необходимо обязательно, так как вызывающий заболевание организм – внутриклеточный паразит, из-за которого происходит нарушение процесса дробления клетки.

Выявление таких бактерий, как синегнойная палочка и уреаплазма, необходимо для определения окончательного диагноза заболевания.

Посев на чувствительность к антибиотикам выполняется для определения необходимых антибактериальных средств и их доз.

к оглавлению ↑

Выполнение анализа

Из всех существующих методов, с помощью которых выполняется диагностика инфекционных заболеваний, бактериологический посев на флору является наиболее точным.

При этом лабораторном исследовании определяется не только сам возбудитель, но и его количество, а также чувствительность. Метод определяет как патогенную, так и условно-патогенную микрофлору.

Материалом для исследования может являться:

  • моча;
  • кровь;
  • мокрота;
  • материнское грудное молоко;
  • сперма;
  • жидкость из плевры (оболочки легких);
  • смыв из бронхов;
  • желчь;
  • спинномозговая жидкость, специально полученная для диагностики;
  • воспалительная жидкость – экссудат;
  • мазок.

Мазок – это образец любой ткани или материала, являющегося производным от жизнедеятельности человека, который наносится на предметное стекло для дальнейшего изучения под микроскопом. Срок выполнения может составлять максимально две недели, что зависит от типа определяемого микроорганизма.

Мазок при исследовании урогенитального тракта женщины позволяет выявить воспаления слизистых уретры, влагалища или цервикального канала.

При этом появляется возможность диагностики следующих заболеваний:

  • молочница (кандидоз);
  • гонорея;
  • трихомониаз;
  • вагиноз бактериальный.

Мазок также может быть взят из: носоглотки, зева (отверстия, проходящего в глотку изо рта), или конъюнктивы.

Такой анализ, как мазок из зева выполняется для определения доминирующих бактерий в данной области. Среди болезнетворных организмов, населяющих зев, можно выявить золотистые стафилококки, провоцирующие появление чирей на коже. При возникновении ангины, сопровождающейся осложнениями на внутренние органы, может проявиться наличие стрептококков. Это значит, что опять необходим мазок из зева.

При заборе анализа стерильной ватной палочкой пациенту требуется широко открыть рот и откинуть назад голову. Мазок из зева – это безболезненная процедура, требующая, однако выполнения предварительных рекомендаций.

За несколько дней до сдачи анализа необходимо прекратить пользоваться ополаскивателями и спреями для освежения полости рта или лечения горла, а также мазями для носа. В день забора анализа из зева чистка зубов не рекомендуется.

к оглавлению ↑

Анализ мочи

Исследование мочи позволяет выявить бактерии, такие, например, как синегнойная палочка, являющиеся причиной воспалительного процесса мочевыводящих путей, а также определить их концентрацию.

Выявление патогенных бактерий считается положительным результатом. Количество бактерий в биоматериале подсчитывается в КОЕ – колониеобразующих единицах.

Оно выражается, к примеру, таким числом – десять в шестой степени.

При положительном результате исследования подбирается эффективный антибиотик. При этом следует помнить, что перед введением препарата пациенту требуется предварительная проба на чувствительность к антибиотикам. Определение чувствительности бактерий к антибактериальному препарату выполняется диско-диффузионным методом.

Для исследования пригодна средняя порция утренней мочи. Ее количество, достаточное для анализа, – 3-5 мл. Она собирается в одноразовый контейнер из пластика, который заранее выдается в лаборатории. Перед сдачей анализа мочи необходимо обработать гениталии. Применение антисептических средств при этом не рекомендуется.

Сдавать анализ мочи не рекомендуется при прохождении антибактериальной терапии. Это является возможным только по истечении двух недель после окончания курса лечения. Собранный анализ нельзя хранить дома, так как в тепле происходит размножение появившихся бактерий, например синегнойной палочки, уже через несколько часов.

Источник: http://OAntibiotikah.ru/diagnostika/analiz-na-chuvstvitelnost-k-antibiotikam.html

Анализ на чувствительность к антибиотикам: для чего нужен. Посев на чувствительность к антибиотикам: где сделать в Москве?

Методы определения антибиотикочувствительности
СВАО ВАО ЮВАО ЮАО ЮЗАО ЗАО ЦАО СЗАО САО 01 02 03 05 06 07 08 09 1 0 1 1 1 2 14 18 15 16 17 Бабушкинская Проспект Мира Первомайская Бауманская Павелецкая Теплый Стан Шипиловская Пражская Академическая Университет Баррикадная Речной Вокзал Октябрьское Братиславская Таганская Академика Янгеля Октябрьское поле

Микроорганизмы по отношению к конкретному виду антибиотика могут характеризоваться как чувствительные, условно-устойчивые и устойчивые. Чувствительными патогенными микроорганизмами являются те, что подавляются рекомендованными дозами антибактериального препарата. Условно-устойчивые для подавления требуют увеличение дозы. Активность устойчивых патогенных микроорганизмов не подавляется даже повышенными дозами антибиотика.

Чувствительность микрофлоры к антибиотикам индивидуальна: у разных людей бактерии могут реагировать на одни и те же антибиотики по-разному. Поэтому назначение антибактериальных препаратов на основании лишь среднестатистической картины не всегда дает желаемый лечебный эффект.

Между тем любой антибиотик – это серьезное лечебное средство, обладающее побочными действиями. В частности, при его применении гибнут не только патогенные бактерии, но и полезные микроорганизмы.

Может получиться ситуация, когда антибиотик уничтожит полезную микрофлору, а возбудитель заболевания не пострадает – по причине его устойчивости к данному антибиотику.

Чтобы обеспечить эффективность проводимого курса антибактериальной терапии, врач должен быть уверен, что назначаемый им антибиотик действительно справится с выявленным возбудителем заболевания.  Для этого и нужен анализ на чувствительность к антибиотикам.

Когда назначается анализ на чувствительность к антибиотикам

Анализ на чувствительность микрофлоры к антибиотикам назначается, если необходимо:

  • определить наиболее эффективно действующий препарат. Чаще всего анализ на чувствительность к антибиотикам назначается при лечении ЗППП, но необходимость в нем может возникнуть и при лечении других инфекционных заболеваний;
  • избежать «привыкания» патогенных микроорганизмов к антибиотику – в случаях повторного использования антибактериальной терапии в течение ограниченного периода времени;
  • заменить один препарат на другой, например, в случае проявления аллергической реакции.

Как делается анализ на чувствительность к антибиотикам

Для анализа используется различный биологический материал – в зависимости от заболевания это может быть моча, кал, мазок (из влагалища, уретры, с задней стенки глотки), грудное молоко, мокрота, слюна, и т.д.

Анализ на чувствительность к антибиотикам относится к культуральным (микробиологическим) исследованиям. Поэтому другое его название – посев на чувствительность к антибиотикам.

Наибольшее распространение имеет диско-диффузный метод проведения анализа. В соответствии с данным методом патогенные микроорганизмы засеваются в питательную среду. Сверху накладываются диски, пропитанные антибиотиками. После чего посев помещается в термостат на 16-18 часов. Результат покажет, насколько тот или иной антибиотик способен справиться с данными бактериями.

В «Семейном докторе» для анализа чувствительности к антибиотикам используется также автоматический анализатор Vitek, обеспечивающий высокую стандартизацию и компьютеризацию исследования.автоматический анализатор

Сколько времени занимает анализ на чувствительность к антибиотикам

В зависимости от метода анализа результаты анализа поступают к врачу через 2-3 дня после сдачи материала в лабораторию.

Как долго действительны результаты анализа на чувствительность к антибиотикам

Анализ на чувствительность к антибиотикам действителен только в период заболевания, по поводу которого он был назначен, и до начала антибиотикотерапии.

То есть пока не началось лечение антибиотиками, картина остаётся та же, но само лечение может сказаться на чувствительности патогенных организмов к применяемым антибиотикам.

Поэтому в случае повторного заболевания анализ может быть назначен снова.

Подготовка к анализу на чувствительность к антибиотикам

Необходимо соблюдать стандартные требования для сдачи каждого вида биологического материала:

  • при сдаче мочи собирается средняя порция (первая порция мочи пускается в унитаз). Моча собирается в стерильный контейнер. Перед сбором мочи обязательны гигиенические процедуры;
  • грудное молоко собирается до кормления ребенка. Первая порция молока из каждой груди сбрасывается, следующие 0,5-1 мл молока из каждой груди собираются в отдельный стерильный контейнер;
  • перед забором мазка из зева и носоглотки не следует есть (в течение 4-5 часов до сдачи анализа);
  • если вы сдаете мазок из влагалища, уретры или секрет простаты, желательно воздержаться от половой жизни (в течение 1-2 дней до сдачи анализа).

Где сдать анализ на чувствительность к антибиотикам в Москве

Сделать анализ на чувствительность к антибиотикам (посев на чувствительность к антибиотикам) в Москве Вы можете в АО «Семейный доктор». Сдать биологический материал анализ можно в любой из поликлиник компании.

Записаться на диагностику

fdoctor.ru использует cookies. Правила использования.

Источник: https://www.fdoctor.ru/diagnostika/analiz_na_chuvstvitelnost_k_antibiotikam/

Определение антибиотикочувствительности микроорганизмов

Методы определения антибиотикочувствительности

Современные требования к определению антибиотикочувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом

Инфекционные болезни, вызываемые бактериальными патогенами, во всем мире представляют серьезную угрозу здоровью и жизни людей.

Ситуация усугубляется угрожающим распространением антибиотикорезистентных бактерий. По результатам масштабного исследования, только в Европе и США каждый год до 50 тыс. жизней уносят инфекции, вызванные возбудителями, устойчивыми к лекарственной терапии, к 2050 году прогнозируется рост летальных исходов до 10 млн в год.

В статье рассмотрели вопросы стандартизации диско-диффузионного метода для определения чувствительности патогенов к антимикробным препаратам, который подходит для тестирования большинства бактериальных патогенов, в том числе со сложными питательными потребностями.

Больше статей в журнале «Справочник заведующего клинико-диагностической лабораторией» Активировать доступ

Одной из основных задач микробиологических лабораторий медицинских учреждений, помимо идентификации микроорганизма, вызывающего инфекционное заболевание, является определение чувствительности возбудителя к АМП, результаты которого необходимы для назначения наиболее подходящей терапии и принятия мер по предотвращению распространения инфекции. Ошибки при выполнении тестирования чувствительности приводят к неправильному выбору антибиотиков для лечения и способствуют распространению резистентности к антибактериальным препаратам.

Методы для определения чувствительности патогенов к АМП

Для определения чувствительности патогенов к АМП в микробиологических лабораториях медицинских учреждений используются различные методы, наиболее распространенным из них остается диско-диффузионный метод.

Он подходит для тестирования большинства бактериальных патогенов, в том числе со сложными питательными потребностями.

Метод является универсальным для широкого круга АМП и не требует обязательного использования специального оборудования.

Точность выполнения метода зависит от четкого соблюдения стандартной процедуры исследования, от качества дисков с АМП и качества питательных сред, регулярного проведения процедуры по контролю качества и др

Качество дисков

В ходе проведенных исследований обнаружено неравнозначное качество исследованных дисков разных производителей ( етировались диски 10 фирм-производителей). Диски как минимум от трех фирм-производителей показали отличное и стабильное качество. От некоторых производителей диски с АМП нескольких наименований показали неприемлемое качество.

Качество питательных сред

В печати периодически поднимается вопрос и о качестве питательных сред для определения чувствительности микроорганизмов к АМП.

Документы, регламентирующие качество используемой питательной среды

Посмотреть >>

Для определения соотношения использования тех или иных питательных сред в государственных учреждениях здравоохранения можно использовать результаты анализа государственных закупок, которые публикуются на официальном сайте госзакупок.

Мониторинг питательных сред

Мониторинг более 300 электронных аукционов по закупке питательных сред различными государственными бюджетными учреждениями здравоохранения в 2019 году продемонстрировал, что микробиологические лаборатории медицинских учреждений для определения чувствительности микроорганизмов к АМП диско-диффузионным методом используют, как правило, две питательные среды — агар Мюллера-Хинтон и среду типа АГВ.

Приоритет государственных закупок питательных сред для определения чувствительности микроорганизмов к АМП в настоящее время сдвигается в сторону агара Мюллера — Хинтон как импортного, так и отечественного производства: его доля в объеме государственных закупок питательных сред данного назначения составляет более 60%.

В лабораторной диагностике определения чувствительности микроорганизмов к АМП наметилась устойчивая тенденция к переходу микробиологических лабораторий страны на применение питательной среды Мюллер-Хинтон II.

Недавно экспертами EUCAST опубликованы результаты по оценке качества 21 образца агара Мюллера-Хинтон от 17 производителей с использованием 4 тест-штаммов.

Посмотреть результаты исследований в таблице

Результаты исследований обнаружили существенные различия между изученными образцами. Некоторые образцы показали отличные результаты и полностью соответствовали критериям контроля качества, рекомендованным EUCAST и CLSI.

Образцы агаров Мюллер-Хинтон некоторых производителей имели отклонения показателей качества для определенных АМП, а некоторые показали вообще неприемлемые результаты, что может привести к неправильной интерпретации результатов определения чувствительности микроорганизмов к АМП диско-диффузионным методом.

Читать полную версию статьи в журнале «Справочник заведующего КДЛ» >>

Источник: https://www.provrach.ru/article/9411-qsq-19-m11-18-opredelenie-antibiotikochuvstvitelnosti-mikroorganizmov

Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Методы определения антибиотикочувствительности
Классификация, общие подходы к проведению. Диффузионные методы: метод бумажных дисков, Е-тест.   Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: 1. Диффузионные методы: • с использованием дисков с антибиотиками • с помощью Е-тестов 2.

      Методы серийных разведений: • разведение в жидкой питательной среде (бульоне) • разведение в агаризованной среде Методы определения чувствительности были разработаны во второй половине 60-х – начале 70-х годов XX века и с тех пор с методической точки зрения не претерпели принципиальных изменений.

Для всех методов общими являются следующие этапы: – приготовление и проверка качества питательных сред – приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма) – инокуляция – для дифузионных методов – этап наложения дисков или полосок Е-теста на плотную питательную среду.

– инкубирование – учет и интерпретация результатов – формулировка рекомендаций по Лечению Диффузионные методы основаны на диффузии антибактериального препарата (АБП) из носителя в плотную питательную среду, инокулированную микроорганизмом, и регистрации диаметра зоны ингибирования (задержки) роста исследуемого микроорганизма.

• Метод менее чувствителен и менее точен, чем метод серийных разведений, но на практике применяется чаще из-за своей простоты. Размещено на реф.рф. • Скорость диффузии в агар любого препарата зависит от его структуры, молекулярной массы, наличия примесей, состава и рН среды. Метод бумажных дисков с антибиотиком (дискодиффузионный метод).

• Для проведения этого метода используют стандартные диски, содержащие определенное количество антибиотиков, и стандартную питательную среду, необходимую для роста данного вида микроорганизма. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК.

• На поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности. • Помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. • Инкубируют при уcловиях, благоприятных для каждого конкретного микроорганизма. • Измеряют диаметры зон задержки роста вокруг диска в миллиметрах (с учетом диаметра диска).

• Оценивают результат по специальной таблице путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны в таблице. • Исследуемую культуру относят к одной из трех категорий: чувствительная, умеренно- чувствительная и устойчивая

Е-тест (E-test или эпсилометрический метод) Метод близок по технологии постановки к методу бумажных дисков. • В качестве носителя используется узкая полоска полимера (0.5х6.0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Значения концентрации АБП в каждом участке полоски нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности. • Ингибирование роста микроорганизма вокруг полоски носителя происходит в зоне, где концентрация антибиотика, диффундирующего из носителя, выше МПК. • В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е- теста получают значение МПК. Е-тест сочетает простоту постановки метода бумажных дисков и точность метода серийных разведений

Методы, используемые для сравнительной оценки in vitro лекарственных средств антимикробной терапии: метод серийных разведений в жидкой и плотной питательных средах

  Методы серийных разведений: • Позволяют количественно оценить чувствительность выделенного микроорганизма к антибактериальным средствам и определить МПК препарата. • Используют для сравнительной оценки антимикробной активности in vitro разрабатываемого препарата-генерика и оригинального средства.

• Для определения величины МПК заданные концентрации антибиотиков вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма. После инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста. • Основаны на использовании двукратных последовательных разведений концентраций АБП от максимальной к минимальной (например, от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д.

до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). • Проводятся в жидкой и агаризованной питательных средах. Метод серийных разведений в жидкой питательной среде (бульоне) Существует 2 варианта данного метода: макрометод (пробирочный) и микрометод (планшетный). Макрометод . • Тестирование проводят в пробирках в конечном объеме 1 мл для каждого разведения.

• Питательный бульон разливают по 0,5 мл в каждую пробирку. Количество пробирок определяют необходимым диапазоном разведений АБП.

• Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов: – Из стандартной суспензии каждого исследуемого микроорганизма (~ 10 8 КОЕ/мл) готовят рабочую суспензию ( ~ 10 6 КОЕ/мл) • Приготовление двукратных серийных разведений АБП: – готовят основной раствор АБП исследуемого препарата-генерика и препарата сравнения (оригинального) в концентрации 1000 мкг/мл и выше (с учетом содержания содержания активного вещества). -из основных растворов АБП исследуемого препарата-генерика и препарата сравнения (оригинального) готовят рабочие растворы АБП с использованием жидкой питательной среды. (Концентрация рабочих растворов рассчитывается исходя из необходимой максимальной концентрации в ряду серийных разведений с учетом фактора разбавления при последующей инокуляции суспензией микроорганизма) ‐ готовят серийные разведения: 0,5 мл рабочего раствора АБП вносят в первую пробирку, содержащую 0,5 мл бульона. Перемешивают. Новой пипеткой (наконечником) переносят 0,5 мл раствора АБП в бульоне во вторую пробирку, содержащую 0,5 мл бульона и т.д., пока не будет приготовлен весь необходимый ряд разведений. Из последней пробирки 0,5 мл удаляют. Т.о., получают ряд пробирок с растворами АБП, концентрации в которых отличаются в соседних пробирках в 2 раза • Инокуляция: по 0,5 мл микробной суспензии с концентрацией микроорганизма ~ 10 6 вносят в каждую пробирку с 0,5 мл соответствующего разведения АБП. Конечная концентрация микроорганизма в каждой пробирке ~ 5х10 5 КОЕ/мл. • Контроль – пробирка с бульоном и культурой микроорганизма (контроль роста). Отрицательный контроль – пробирка с бульоном (контроль стерильности). • Инкубирование: все пробирки, закрытые пробками, или колпачками, инкубируют при условиях, обеспечивающих рост испытуемых микроорганизмов. • Учет и интерпретация результатов: пробирки с посевами просматривают в проходящем свете. Рост культуры в пробирке с АБП сравнивают с контрольной пробиркой. – наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. ‐ по мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). лекарственных средств антибактериальной терапии – сравнивают результаты, полученные для оригинального ЛС и исследуемого генерического ЛС. Делают вывод об их эквивалентности в отношении спектра (перечень используемых микрорганизмов) и степени антимикробной активности (значения МПК).

• Определение МБК: из нескольких последних пробирок с задержкой роста делают посев петлей на сектора чашки Петри. За МБК, которая, как правило, на несколько разведений меньше МПК, принимают концентрацию препарата в последней пробирке, посев из которой не дал роста. • Недостаток метода: низкая производительность – применение ограничивается исследованиями небольшого числа микроорганизмов.

Микрометод •Процедура проведения испытания аналогична таковой при использовании макрометода •Величина конечного объема – до 0,2 мл •Наличие соответствующего оснащения лаборатории: планшет на 96 лунок со стерильными крышками, многоканальных пипеток •Рабочие растворы АБП можно вносить в лунки планшет заранее, после чего хранить запаянными в полиэтилене при температуре ниже 60°С до момента использования. • Преимущества метода: – высокая производительность – возможность длительного хранения заранее приготовленных планшет – экономия расходных материалов. Размещено на реф.рф Метод серийных разведений в агаризованной среде • Принцип проведения испытания аналогичен методу разведений в бульоне • Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов: – стандартная суспензия каждого исследуемого микроорганизма должна содержать ~ 10 8 КОЕ/мл. – стандартную микробную суспензию для проведения эксперимента разводят ~ в 10 раз до получения концентрации микроорганизма ~ 10 7 КОЕ/мл • Приготовление двукратных серийных разведений АБП для оригинального препарата и исследуемого препарата- генерика проводят аналогично методу разведений в бульоне • Агаризованную среду расплавляют и охлаждают до температуры 45-50°С. • Приготовление чашек с агаризованной средой и разведениями АБП: смешивают агаризованную среду и растворы АБП непосредственно в чашке Петри (для пластиковых чашек диаметром 90 мм к 2 мл раствора АБП добавляют 18 мл расплавленного и охлажденного агара). • Инокуляция и инкубирование: бактериологической петлей переносят 1-2 мкл суспензии исследуемых микроорганизмов на поверхность агаризованной среды. Таким образом, конечная посевная доза составляет ~ 10 4 КОЕ (стандартная бактериологическая петля диаметром 3 мм переносит 1-2 мкл жидкости). • На поверхности агара образуется пятно диаметром 5-8 мм. После подсыхания чашки переворачивают и инкубируют при условиях, благоприятных для роста исследуемых микроорганизмов. • Учет и интерпретация результатов: аналогично методу разведения в бульоне. Чашки Петри помещают на темную, не отражающую свет поверхность. За МПК принимают концентрацию АБП, вызвавшую полное ингибирование видимого роста. • Контроль: инокулированные суспензией культур микроорганизмов чашки с агаром без АБП (контроль роста). Отрицательный контроль: чашки с агаром (контроль стерильности). Преимущества метода: на одной чашке можно определять чувствительность нескольких микроорганизмов.

Объем исследований по сравнительной оценке in vitro антимикробной активности для генерических и оригинальных средств антимикробной терапии

  Объем исследований по сравнительной оценке in vitro антимикробной активности генерических противомикробных лекарственных средств: •Задача исследования: подтверждение соответствия генерического препарата референсному (оригинальному) по спектру (микроорганизмы) и степени (значение МПК, МБК) антимикробной активности.

•Набор тестируемых микроорганизмов: по 1-2 штамма каждого из входящих в спектр действия микроорганизмов – эталонные коллекционные штаммы -выделенные в стационарах клинические штаммы •Определяются значения МПК и МБК •Контроль: препарат сравнения – оригинальный препарат •Ожидаемый результат: МПК и МБК разрабатываемых генерических противомикробных ЛС входят в допустимые диапазоны значений и полностью совпадают с МПК и МБК препаратов сравнения (оригинальных ЛС) в отношении коллекционных и клинических штаммов. Порядок исследований по определению in vitro антимикробной активности новых противомикробных соединений: •Первичная оценка чувствительности к новым соединениям эталонных штаммов различных видов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов (4-5 штаммов для каждого вида); •Детальное изучение степени антибактериальной активности соединений в отношении штаммов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов из международных коллекций с известными механизмами резистентности (метод серийных разведений); •Исследование активности в отношении клинических штаммов условно патогенных и патогенных микроорганизмов в сравнении с известными препаратами близкой химической группы или аналогичными по антимикробному эффекту: – в случае преимущественной активности в отношении грамположительных микроорганизмов контроль – природные пенициллины, цефалоспорины I – II поколений, макролиды, линкозамиды; – при активности в отношении грамотрицательных микроорганизмов контроль – полимиксин В, азтреонам; -для препаратов широкого спектра действия контроль – полусинтетические пенициллины, аминогликозиды, тетрациклины, цефалоспорины III – IV поколений • Оценка антимикробной активности в отношении проблемных возбудителей: метициллинорезистентные стафилококки, устойчивые к бензилпенициллину Streptococcus pneumonia, множественноустойчивые энтеробактерии, устойчивые к аминогликозидам бактерии рода Pseudomonas и др. •Первоначальные терапевтические концентрации новых препаратов устанавливаются с учетом токсичности, определенной в опытах по изучению острой токсичности;

• Сравнительную степень антибактериальной активности препаратов оценивают величиной МПК или МБК, определяемых не менее, чем при 2-х значениях посевной дозы: минимальной – 10 4 – 10 5 КОЕ/мл и максимальной – 10 6 – 10 9 КОЕ/мл в зависимости от вида возбудителя; На сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако, данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии.

Источник: http://referatwork.ru/farmacevticheskaya_biologiya/section-32.html

Анализ на чувствительность к антибиотикам: суть, как сдавать, расшифровка

Методы определения антибиотикочувствительности

Анализ на чувствительность к антибиотикам является обязательным при возникновении у врача подозрений, что заболевание пациента имеет бактериальную природу. Это связано с тем, что медики пытаются контролировать назначение данных препаратов, чтобы не стимулировать мутации и не вызывать резистентность у микроорганизмов.

Определение

Анализ на чувствительность к антибиотикам – это лабораторный способ выявления препарата, который будет оказывать наибольшее действие на патогенную флору в данном конкретном случае болезни.

На данный момент антибактериальная терапия применяется достаточно широко там, где она нужна, а также в тех случаях, когда это совсем не обязательно, для перестраховки от возможных осложнений. Например, после кесарева сечения, лапароскопических операций, удаления конкрементов из почек или мочеточников и т. д.

Фармацевтическая промышленность может предложить широкий выбор препаратов как в плане цены, так и в плане действенности. Для того чтобы не «тыкать пальцем в небо» и назначить эффективный антибиотик, нужно провести посевы на чувствительность.

Показания

Перед тем как врач подберет терапию, пациенту необходимо сдать некоторые анализы.

Посев на чувствительность к антибиотикам назначается, если необходимо определить лекарство, которое в данном случае будет наиболее уместно.

Чаще всего это исследование назначается для лечения заболеваний, передающихся половым путем, или ЗППП. Для детей же необходимость в определении антибиотика – это обязательное условие.

Кроме того, определение чувствительности нужно, чтобы избежать устойчивости бактерий к лечению. Если пациента недавно лечили антибиотиками, и теперь вновь необходим повторный курс, то требуется замена препарата. Это позволит использовать меньшие дозы лекарства и не вызывать мутации у возбудителя. В гнойных хирургических отделениях антибиотики меняют каждые два-три месяца.

Данный анализ необходим еще в том случае, если на основную группу антибиотиков у больного возникает аллергическая реакция.

Диффузионные методы

Анализ мочи на чувствительность к антибиотикам, и не только ее, можно провести несколькими способами. Первый из них – это метод дисков. Проводят его следующим образом. В чашку Петри заливают агар, а когда он застынет, специальным инструментом наносят исследуемый материал.

Затем по поверхности агара раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. После чашку закрывают и ставят в термостат. Постепенно диск погружается в желатин, а антибиотик диффундирует в окружающее пространство. Вокруг бумаги образуется зона «подавления роста».

Чашки проводят в термостате двенадцать часов, затем их вынимают и измеряют диаметр вышеуказанной зоны.

Второй способ – это метод Е-теста. Он похож на предыдущий, но вместо бумажных дисков используют полоску, которая на своем протяжении в разной степени пропитана антибиотиком.

После двенадцати часов экспозиции в термостате чашку Петри достают и смотрят, в каком месте зона подавления роста соприкасается с полоской бумаги.

Это будет наименьшая концентрация препарата, которая необходима для лечения заболевания.

Достоинством этих тестов является быстрота и простота их проведения.

Методы разведения

Анализ на флору и чувствительность к антибиотикам можно провести и другим способом. Этот метод основан на последовательном уменьшении концентрации антибиотика (от максимальной до минимальной) с целью определить, в какой из пробирок прекратится сдерживание роста бактерий.

Сначала подготавливают растворы препарата. Затем их вносят в жидкую среду с бактериями (бульон или агар). Все пробирки на ночь (то есть 12 часов) помещаются в термостат при температуре 37 градусов, а утром проводят анализ получившихся результатов.

Если содержимое пробирки или чашки Петри мутное, это свидетельствует о росте бактерий и, следовательно, неэффективности антибиотика в данной концентрации.

Первая пробирка, в которой визуально не будет определяться рост колоний микроорганизмов, будет считаться достаточной концентрацией для лечения.

Это разведение препарата принято называть минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Она измеряется в миллиграммах на литр или микрограммах на миллилитр.

Интерпретация результатов

Анализ на чувствительность к антибиотикам нужно уметь не только правильно сделать, но и грамотно расшифровать. Основываясь на получаемых результатах, все микроорганизмы делят на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные. Для того чтобы различать их между собой, используются условные пограничные концентрации препаратов.

Эти значения не являются постоянными и могут изменяться в зависимости от приспосабливаемости микроорганизмов. Разработкой и пересмотром этих критериев поручено заниматься химиотерапевтам и микробиологам.

Одной из официальных структур такого рода является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США.

Разработанные ими стандарты признаны во всем мире для использования в оценке активности антибиотиков, в том числе для рандоминизированных многоцентровых исследований.

Различают два подхода к оценке результатов анализа на чувствительность к антибиотикам: клинический и микробиологический. Микробиологическая оценка ориентируется на распределение эффективных концентраций антибиотика, а клиническая – на качество антибактериальной терапии.

Резистентные и чувствительные микроорганизмы

Анализ – определение чувствительности антибиотикам – назначается с целью выявить чувствительные и устойчивые микроорганизмы.

Чувствительными называются возбудители, которые поддаются лечению антибиотиками в средней терапевтической концентрации.

Если достоверная информация о категории чувствительности микроорганизма отсутствует, то учитываются данные, полученные в условиях лаборатории.

Они совмещаются со знаниями о фармакокинетике используемого препарата, и после синтеза данной информации делается вывод о восприимчивости бактерий к лекарству.

К резистентным, то есть устойчивым, микроорганизмам относятся те бактерии, которые продолжают вызывать заболевания даже при использовании максимальных концентраций лекарственных веществ.

Промежуточную резистентность устанавливают в том случае, если заболевание в процессе лечения может иметь несколько исходов. Выздоровление пациента возможно в случае использования высоких доз антибиотиков либо в случае прицельного накапливания лекарства в месте инфекции.

Минимальная бактерицидная концентрация

Анализ на микрофлору и чувствительность к антибиотикам определяет такой показатель, как минимальная бактерицидная концентрация, или МБК. Это самая низкая концентрация препарата, которая в лабораторных условиях вызывает элиминацию практически всех микроорганизмов в течение двенадцати часов.

Знание этого показателя врачи используют, когда назначают терапию не бактерицидными, а бактериостатическими лекарственными средствами. Или в случаях, когда стандартная антибактериальная терапия оказывается неэффективной. Чаще всего этот анализ заказывают для больных с бактериальным эндокардитом, остеомиелитом, а также при оппортунистических инфекциях.

Что может быть образцом?

Анализ на чувствительность к антибиотикам может проводиться с использованием биологических жидкостей:

– слюна;

– кровь;

– моча;

– сперма;

– грудное молоко.

Кроме того, для определения местной чувствительности производят забор мазков из уретры, цервикального канала и верхних дыхательных путей.

Подготовка к анализам

Бак. анализ на чувствительность к антибиотикам не требует от пациентов существенной подготовки, но некоторые ограничения все-таки есть.

  1. Для исследования используется средняя порция утренней мочи, которая собирается в стерильную посуду. Перед этим пациент обязательно должен осуществить туалет наружных половых органов и рук.
  2. Грудное молоко собирается перед кормлением ребенка. Первая порция сливается, а затем в стерильный контейнер сцеживается несколько миллилитров с каждой груди.
  3. Перед сдачей мазка из носоглотки стоит воздержаться от приема пищи в течение пяти-шести часов.
  4. В случае взятия мазка из половых путей, рекомендуют воздерживаться от половых контактов в течение пары дней.

На сегодняшний день не существует клинических или лабораторных методов, которые бы со стопроцентной вероятностью могли предсказать эффект от антибактериальной терапии. Но в то же время определение чувствительности бактерий к лекарственным веществам может быть ориентиром для врачей в вопросах выбора и коррекции лечения.

Источник: https://FB.ru/article/278441/analiz-na-chuvstvitelnost-k-antibiotikam-sut-kak-sdavat-rasshifrovka

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.